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Dispase II 分散酶II  流式分析

Dispase II 分散酶II 流式分析

簡要描述:

Dispase II 分散酶II 流式分析 中性蛋白mei(Neutral protease),商業(yè)名稱Dispase II,也稱分散酶II,普遍用于不同組織和器官中的細胞分離。Dispase II是一種非特異性金屬蛋白酶,能快速有效且溫和的破壞組織細胞外基質(zhì)釋放單細胞培養(yǎng)物(原代細胞培養(yǎng)物)或收集已培養(yǎng)的細胞將其轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基質(zhì)上(傳代培養(yǎng))。

產(chǎn)品時間:2024-08-19

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Dispase II 分散酶II(中性蛋白mei)


產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱                                       

產(chǎn)品編號                      

規(guī)格               

價格(元)       

Dispase II 分散酶II(中性蛋白mei)

MX1006-100MG

100mg

550

Dispase II 分散酶II(中性蛋白mei)

MX1006-1000MG

1g

2150



產(chǎn)品描述

中性蛋白mei(Neutral protease),商業(yè)名稱Dispase II,也稱分散酶II,普遍用于不同組織和器官中的細胞分離。Dispase II是一種非特異性金屬蛋白酶,能快速有效且溫和的破壞組織細胞外基質(zhì)釋放單細胞培養(yǎng)物(原代細胞培養(yǎng)物)或收集已培養(yǎng)的細胞將其轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基質(zhì)上(傳代培養(yǎng))。另外,還能預(yù)防懸浮細胞培養(yǎng)過程中發(fā)生的成團現(xiàn)象。Dispase II極其穩(wěn)定,不會受溫度、pH和血清內(nèi)容物的干擾;通過螯合劑或稀釋很容易失活;酶活溫和,對細胞損傷小,可良好維持細胞膜完整性。


本品來源于多粘芽孢桿菌(Bacillus polymyxa),無支原體或其他動物病毒污染。以非無菌的凍干粉形式提供,比活力≥0.8 U/mg蛋白,使用前需進行除菌。常用工作濃度范圍為0.6-2.4 U/ml。


產(chǎn)品特性

1)  EC NO:3.4.24.4

2)  同義名:Neutral protease中性蛋白mei

3)  比活力:≥0.8 U/mg protein (37℃, casein as substrate, pH 7.5)

4)  酶活力單位定義:在37℃,pH 7.5的反應(yīng)條件下,1min內(nèi)釋放福林酚陽性反應(yīng)氨基酸和多肽量相當(dāng)于1 μmol (181 μg)酪氨suan所需的酶量即為一個活力單位。

5)  pH:6.0 - 8.5

6)  激活劑:Ca2+為2mM,該酶已含足量Ca2+確保酶活力。

7)  抑制劑: EDTA, EGTA, Hg2+,以及其他重金屬。該酶活性不受血清干擾。


保存與運輸方法

保存:2-8℃干燥保存,至少1年有效。

運輸:冰袋運輸。


使用方法

一、儲存液和工作液制備

1)儲存液制備:用Hepe緩沖鹽溶液(50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl)溶解Dispase II凍干粉,配制成10mg/ml的儲存液,用0.22µM濾膜過濾除菌。本儲存液置于2-8℃,2周穩(wěn)定;根據(jù)單次用量分裝凍存,高達2個月穩(wěn)定,避免反復(fù)凍融。


2)工作液制備:使用時用合適的細胞培養(yǎng)液將儲存液稀釋到工作液濃度即可,常用工作濃度為0.6-2.4 U/ml。不推薦使用>2.4 U/ml的工作濃度。具體使用濃度請根據(jù)自身實驗體系或參考文獻來調(diào)整。


二、組織分離

1)用無菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成3-4mm小片,之后用無菌PBS緩沖液清洗組織片幾次;

2)用Dispase II工作液(0.6-2.4 U/ml)浸沒并37℃孵育進行組織解離;

3)置于水平搖床上,低速轉(zhuǎn)動,37℃孵育直至組織完quan解離;【注意】:第一次使用Dispase II,通過細胞計數(shù)來確定總反應(yīng)時間。對于堅硬致密組織需要1h的孵育時間,不過孵育時間幾小時也不會有副作用。

4)若有需要,將消化產(chǎn)物用無菌不銹鋼網(wǎng)過篩,從而分離解散細胞和殘留組織,或當(dāng)更大片段組織靜置到管底,輕輕倒出上層細胞。若需要進一步解離,則加入新鮮的Dispase II工作液到殘留組織。

5)低速離心收集細胞,吸掉酶工作液;

6)用適當(dāng)?shù)募毎囵B(yǎng)液重懸細胞,置于正常預(yù)優(yōu)化條件下培養(yǎng)。


三、細胞亞培養(yǎng)

1)用37℃預(yù)熱的Dispase II工作液完quan覆蓋細胞,置于37℃孵育5min;

2)吸掉溶液,于37℃再孵育10min;

3)顯微鏡觀察以確定消化情況,若有需要,可再孵育15min;

4)用細胞培養(yǎng)液重懸細胞,低速離心并用培養(yǎng)基清洗細胞幾次;

5)用新鮮細胞培養(yǎng)液重懸細胞;

6)按照常規(guī)方法進行分盤傳代。


注意事項

1)Dispase是Godo Shusei Co., Ltd.的注冊商標(biāo)。

2)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


 — — Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】


上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作,主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本,以誠為信、合同守信"的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。



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