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橙色線粒體熒光探針

橙色線粒體熒光探針

簡要描述:

MitoTracke Orange CMTMRos 橙色線粒體熒光探針;MitoTracker Green FM 綠色線粒體熒光探針;Lysotracker Green 綠色溶酶體熒光探針;羅丹明123;JC-1 線粒體凋亡檢測;CAS: 201860-17-5;

產(chǎn)品時間:2024-03-21

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MitoTracke Orange CMTMRos 橙色線粒體熒光探針

產(chǎn)品標(biāo)簽

MitoTracke Orange CMTMRos 橙色線粒體熒光探針;MitoTracker Green FM 綠色線粒體熒光探針;Lysotracker Green 綠色溶酶體熒光探針;羅丹明123;JC-1 線粒體凋亡檢測CAS: 201860-17-5;

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號

規(guī)格

價格(元)

MitoTracke Orange CMTMRos 橙色線粒體熒光探針

MX4311-50UG

50µg

450

產(chǎn)品描述

MitoTracke Orange CMTMRos是一種橙色熒光染料,用于對活細胞線粒體進行染色,該染料的積累取決于膜電位。 乙醛固定后,該染料可穩(wěn)定保存。

產(chǎn)品特性

分子式:C24H24Cl2N2O

分子量:427.37

外觀:紫色/紅色固體

溶解性:溶于DMSO1mM

純度:≥90%HPLC


Ex/Em554/576nm  

image.png

化學(xué)結(jié)構(gòu)式:image.png

保存與運輸方法

保存:-20°C避光干燥保存,收到貨至少12個月有效。 

運輸:冰袋運輸。

注意事項

1) 本品量非常少,使用前低速離心后直接加適當(dāng)溶劑溶解使用,切勿分裝稱量。

2) 整個染色過程中需注意避光。

3) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 儲存液的配制

使用前,先將本品取出回溫至室溫,并對其進行簡單低速離心使溶液降至管底。之后加入116.9946µL高質(zhì)量無水的DMSO溶解MitoTracke Orange CMTMRosMw=427.37 g/mol),使其濃度為1mM。儲存液能現(xiàn)用,若用不完,請根據(jù)單次用量分裝,≤-20℃避光干燥保存。

2. 工作液的配制

根據(jù)不同的實驗?zāi)康氖褂貌煌奶结槤舛龋韵碌钠鹗疾僮鳁l件僅作參考,可根據(jù)細胞類型和其他的相關(guān)因素如細胞或組織的透化等進行適當(dāng)調(diào)整。

利用培養(yǎng)基或合適的緩沖液將1mM 儲存液稀釋至工作濃度,工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。常用的工作濃度范圍是25-500nM,但對于后續(xù)需要進行固定和透化的細胞染色,建議使用工作濃度范圍在100-500nM。為了降低探針加載過度可能引起的假陽性,建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

3.   染色步驟(貼壁細胞)

1)將細胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上,加入合適培養(yǎng)基,使其爬片生長。

2)待細胞生長到合適密度,吸除培養(yǎng)液,加入適量37℃預(yù)熱的含探針培養(yǎng)基。于特定的生長狀態(tài)下孵育1545min(具體孵育時間需根據(jù)細胞類型而定)。

3)利用新鮮培養(yǎng)基替換上述染色液并在熒光顯微鏡(含合適濾片)或熒光酶標(biāo)儀下觀察。若細胞需固定和透化,參考染色后的固定和透化流程。

4.  染色步驟(懸浮細胞)

1)離心沉淀細胞,吸除上清。

2)利用37℃預(yù)熱的含探針培養(yǎng)基重懸細胞,于特定的生長狀態(tài)下孵育1545min(具體時間需根據(jù)細胞類型而定)。

3)離心,吸除染色液,加入新鮮培養(yǎng)基重懸細胞。

4)用含合適濾片的流式細胞儀、基于酶標(biāo)板的分析儀或熒光顯微鏡觀察。如果需要將細胞固定在蓋玻片,于固片前用poly-D-lysine包被載玻片或者蓋玻片。若細胞后續(xù)需要固定或透化,參考染色后的固定和透化流程。

5. 染色后的固定和透化流程

1) 染色后,用新鮮預(yù)熱的緩沖液或生長培養(yǎng)基清洗細胞;

2) 小心吸掉覆蓋細胞的緩沖液或培養(yǎng)基,用含2-4%多聚甲醛的新鮮配制預(yù)熱的緩沖液或培養(yǎng)基來固定。研究顯示內(nèi)皮細胞用3.7%多聚甲*-醛溶液于37℃固定約15min效果很好。

3) 固定之后,用緩沖液清洗細胞幾次;

4) 【可選】若后續(xù)步驟如ICC需要透化,則用含表面活性劑如Triton X-100的緩沖液來透化細胞。一旦透化結(jié)束,用緩沖液清洗細胞并進行后續(xù)ICC流程。研究顯示,用含0.2% Triton X-100PBS緩沖液透化內(nèi)皮細胞10min效果很好。

做為備選方案,細胞也可以用冰丙酮透化處理5min,之后用PBS清洗。即使后續(xù)細胞不用進行其它抗體標(biāo)記,這一丙酮透化步驟也可能改善信噪比。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

 

 

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