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Y190酵母化學感受態(tài)細胞

Y190酵母化學感受態(tài)細胞

簡要描述:

Y190酵母化學感受態(tài)細胞:是GAL4系統(tǒng)酵母雙雜交用實驗菌株,MATa型,能直接轉化質?;蚺cMATα型酵母菌株Y187通過接合(mating)操作進行蛋白相互作用驗證或篩庫實驗。轉化標志為trp1,leu2,cyh2。報告基因為lacZ,HIS3,MEL1。

產品時間:2024-03-20

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Y190 Chemically Competent Cell

酵母菌化學感受態(tài)細胞

溫馨提示

見我司(懋康生物)整理的酵母雙雜交(Yeast two-hybrid assay產品專題。

 

產品關鍵詞:

Y190-GAL4酵母單雜交系統(tǒng);Y1HGoldpGBKT7;pGADT7;Ar Qual;X-α-Gal;Aureobasidin A AbA);金擔子素;

 

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規(guī)格

價格(元)

MF2364-1000UL

Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化學感受態(tài)細胞

10×100μl

290

MF2364-5000UL

Y190 Chemically Competent Cell 酵母菌化學感受態(tài)細胞

50×100μl

1320

 

產品組分:

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貨號(規(guī)格)

MF2364-1000UL

MF2364-5000UL

MF2364-A

Y190 Chemically Competent Cell

-80

10×100μl

50×100μl

MF2364-B

pGADT7 Control Vector (10ng/μl)

-80

10μl  

10μl  

MF2364-C

Carrier DNA (10μg/μl)

-20

100μl 

500μl 

MF2364-D

PEG/LiAC Solution

+4

5ml

25ml

 

產品描述

Y190GAL4系統(tǒng)酵母雙雜交用實驗菌株,MATa型,能直接轉化質?;蚺cMATα型酵母菌株Y187通過接合(mating)操作進行蛋白相互作用驗證或篩庫實驗。轉化標志為trp1,leu2,cyh2。報告基因為lacZ,HIS3,MEL1Y190-GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)需要兩種質粒配套使用,pGB&pACT2pGBKT7& pGADT7。pGB由或pGBKT7改造而來,篩選標志為Trp,用于表達DNA-BD與誘餌蛋白(bait)的融合蛋白;pACT2pGADT7的結構和功能類似,篩選標志為Leu,用于表達AD與誘捕蛋白(prey)的融合蛋白。

本品為經特殊工藝制備的Y190酵母菌化學感受態(tài)細胞,用pGADT7質粒檢測轉化效率>104cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存三個月。

基因型

MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyhr2, LYS2 : : GAL1 UAS-HIS3TATA-HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ

注意事項

  1. 號在冰上融化感受態(tài)細胞。
  2. 轉化高濃度質??上鄳獪p少用于涂板的菌量。同時轉化2-3種質??蛇m當增加質粒的用量。
  3. Y190對高溫敏感,適生長溫度為27-30℃,一旦高于31℃,生長速度和轉化率都呈指數下降。
  4. 菌落變粉紅色并不是污染,而是酵母細胞生長中的一種常見現象。當酵母細胞在平板上培養(yǎng)幾天,將平板內的腺嘌呤消耗殆盡,那時酵母試圖通過自身代謝途徑合成腺嘌呤以供利用。然而,某些菌株ADE2基因被破壞,腺嘌呤合成受阻。且ADE4,5,6,78基因均正常。由此,造成中間產物P-ribosylamino imidazoleAIR)在細胞的積累使得菌落變?yōu)榉奂t色。
  5. 酵母菌在缺陷培養(yǎng)基上生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢,營養(yǎng)缺陷成分越多,生長越慢,以轉化涂板為例:涂YPDA平板于29℃,48h培養(yǎng)可見直徑1mm克?。煌?/span>SD單缺平板于29℃,48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆;涂SD雙缺平板于29℃,60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆;涂SD三缺或四缺平板于29℃,80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克??;
  6. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

  1. Carrier DNA于使用前通過加熱處理使其變性為單鏈狀態(tài),方法如下:95-100 水浴或金屬浴3min,快速插入冰中,靜置3min。重復一次。
  2. 100 µl冰上融化的Y190化學感受態(tài)細胞,依次加入預冷的目的質粒0.5-3 µg,單鏈Carrier DNA 10 µl,PEG/LiAc 500µl,用槍吹打幾次充分混勻,30水浴30 min(在15min時翻轉6-8次混勻)。
  3. 之后將管子放42水浴15 min(在7.5min時翻轉6-8次混勻)。
  4. 5000 rpm離心40s棄上清,用400 µl ddH2O重懸沉淀,離心30s棄上清。
  5. 50 µl ddH2O重懸,涂板,放入29培養(yǎng)48-96 h

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作,主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產等領域。 本公司秉承以人為本,以誠為信、合同守信的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產品。

 

Y190酵母化學感受態(tài)細胞

Y190酵母化學感受態(tài)細胞

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